下丘脑CB1R及内源性大麻素水解酶参与2型糖尿病雄性猕猴HPA轴功能调节

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本文选择经高脂饮食诱导24月成功建立的2型糖尿病及糖尿病前期川西亚种雄性猕猴,研究HPA轴脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolasc,FAAH)、单酰甘油酯酶(monoglycerol lipase,MAGL)、大麻素1型受体(cannabinoid 1 receptor,CB1R)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素释放激素受体(corticotropin releasing hormone receptor 1,CRHR1)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、促肾上腺皮质激素受体(adrenocorticotropic hormone receptor,ACTHR)、糖皮质激素受体(glucocorticoids receptor,GR)及糖皮质激素水平变化,据此探讨2型糖尿病进程中,(1)HPA轴功能变化;(2)内源性大麻素受体及水解酶在HPA轴中的作用。将15只雄性川西亚种猕猴,根据空腹血糖水平及2小时餐后血糖分为健康组(5只),2型糖尿病前期组(5只)及2型糖尿病显性组(5只)。经麻醉处死后,取下丘脑、垂体及肾上腺固定、低温冻存。HE染色检测组织病理变化,免疫组织化学SABC蓝色显色法检测蛋白质表达分布及水平,蛋白质印迹法检测蛋白质表达量,实时荧光定量PCR检测基因相对表达量,免疫酶联吸附实验检测肾上腺皮质醇水平。结果发现,从健康到糖尿病前期再到显性糖尿病的猕猴出现下丘脑室旁核神经元细胞核浓缩,神经垂体部分神经胶质细胞死亡,形成较多均质红染团块,腺垂体嗜酸性细胞增多,肾上腺束状带细胞呈渐进性肿胀状态的病变特征。免疫组织化学染色显示CRH、CB1R、FAAH和MAGL均在各组猕猴下丘脑室旁核神经元胞质有表达,CRHR1分布于神经垂体细胞,ACTH分布于垂体细胞胞质,ACTHR在肾上腺球状带及束状带细胞胞质均有分布,GR在下丘脑室旁核及腺垂体细胞胞质均有分布。蛋白质印迹及实时荧光定量PCR结果均显示从健康到糖尿病前期再到显性糖尿病:(1)下丘脑CRH蛋白质及基因相对表达量逐渐减少,垂体ACTH蛋白质及基因相对表达量逐渐增多,肾上腺皮质醇合成酶基因相对表达量逐渐增多;免疫酶联吸附实验结果显示肾上腺皮质醇含量逐渐增多。(2)垂体CRHR1蛋白质及基因相对表达量先减少后增多,ACTHR蛋白质相对表达量表达逐渐增多,基因相对表达量逐渐降低,下丘脑及垂体GR蛋白质及基因相对表达量逐渐减少。(3)CB1R蛋白质及基因相对表达量逐渐减少,FAAH及MAGL蛋白质及基因相对表达量逐渐增多。因此可以得出结论,从健康、前期到显性,HPA轴分泌功能逐渐增强,糖皮质激素负反馈对HPA轴的抑制作用减弱。同时,CB1R表达逐渐减少,大麻素水解酶表达逐渐增多,表示在2型糖尿病发生过程中,减弱了CB1R及大麻素水解酶对HPA轴分泌功能的抑制作用。
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