全反式维甲酸调控骨形态发生蛋白9诱导前脂肪细胞3T3-L1成骨和成脂分化

来源 :第十届西部骨科论坛暨第九届云南省骨科年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wxtncxmmm
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  目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导前脂肪细胞成骨或成脂分化的作用,以及全反式维甲酸(ATRA)对该作用的影响。方法:用绿色荧光蛋白(GFP)或BMP9编码序列的重组腺毒感染3T3-L1前脂肪细胞,并同时加入1μM的ATRA对BMP9的作用进行干预。采用化学发光法检测第5天、第7天和第9天的碱性磷酸酶(ALP)活性;用Western blot于第11天检测骨钙蛋白(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的表达水平;第14天采用茜素红S染色法检测钙盐沉积情况;第8天利用油红O染色检测细胞内脂质沉积情况;并通过裸鼠皮下细胞移植实验分析ATRA对于BMP9诱导前脂肪细胞体内成骨和成脂分化的作用。荧光素酶报告质粒检测BMP9和ATRA对BMPR-Smad信号转录活性的影响,并用RTPCR和Western blot检测成骨和成脂相关转录因子在mRNA和蛋白水平的表达情况。
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