抗肝纤冲剂对免疫损伤小鼠肝纤维化肝组织病理、TGF-β1-smads信号转导的研究

来源 :第17届全国干扰素及细胞因子学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoyh
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  目的:探讨中药抗肝纤冲剂对免疫损伤小鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法;正常Balb/c小鼠75只,随机分为五组,正常对照组(A组),肝纤维化模型组(B组),秋水仙碱组(C组),抗肝纤冲剂低剂量组(D组),抗肝纤冲剂高剂量组(E组),每组15只。参照腹腔注射猪血清方法制备肝纤维化小鼠模型。A组给予等量生理盐水;各药物组于造模的同时,给予相应剂量的药物灌胃;C组给予0.1mg/kg秋水仙碱肌注;D组于每40mg/kg抗肝纤冲剂溶液灌胃;E组每80mg/kg抗肝纤冲剂溶液灌胃。B组以等量生理盐水灌胃。每天一次,连续7周。观察各组小鼠肝、脾指数;肝功能生化指标;肝组织病理HE染色,观察病理变化;Masson法胶原特殊染色,观察肝组织纤维增生情况;免疫荧光法检测Smads2/3及Smads6/7;实时定量PCR法检测col-I与col-IVmRNA水平;免疫印迹法检测肝内TGF-βl与col-ImRNA的表达。结果:1,比较各组小鼠肝、脾脏器系数,经SPSS10.0方差分析,结果显示,模型组肝、脾脏器系数比正常组显著增加(P<0.01);各用药组与模型组比较,肝、脾脏器系数明显降低(P<0.05或<<0.01)。2.各组小鼠血清肝功能指标恢复情况:结果显示,模型组ALT,TP值明显高于正常对照组(P<0.01, P<0.05); A/G值明显低于正常对照组(P<0.01)。各药物治疗组与模型组相比,皆可降低ALT值,而A/G值升高,差异有统计学意义(P<0.05)。其中抗纤维化高剂量组与模型组相比,差异显著(P<0.01)。3.肝组织HE染色,各用药组肝组织损伤情况均有所好转,其中抗肝纤冲剂高剂量组,鼠肝细胞组织结构多处于接近正常状态。4.胶原特殊染色显示,各用药组与模型组比较,胶原明显减少。5.免疫荧光法显示,各用药组Smads2/3表达明显降低,而Smads6/7表达明显增加,其中抗肝纤冲剂高剂量组更为明显。6.实时定量PCR法检测基因col-Ⅰ与col-ⅣmRNA水平显示,抗肝纤冲剂治疗组可抑制col-Ⅰ,Ⅳ型胶原基因的表达,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01)。7.免疫印迹法检侧肝组织中TGF-β1和Ⅰ型胶原蛋白表达显示,各用药组表达量明显减少,其中抗肝纤冲剂高剂量组尤为明显。表明抗纤冲剂低剂量组则可以抑制肝内TGFβ1及Ⅰ型胶原基因蛋白的表达,与模型组相比差异显著(P<0.01)。结论:抗肝纤冲剂有较好的改善实验鼠肝纤维化的治疗作用。抗肝纤冲剂抗肝纤维化的作用机理,可能与通过TGF-β1/Smad信号转导通路抑制肝内胶原蛋白的表达,从而起到阻断肝纤维化的治疗作用。
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