人脐带间充质干细胞移植对大鼠视网膜缺血再灌注损伤治疗机制的研究

来源 :山东省第十九次眼科学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:clhhjq
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  目的 旨在探讨培养、纯化、扩增人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的最佳条件和方法:研究hUCMSCs移植到视网膜缺血再灌注大鼠玻璃体腔后视网膜表达各种神经营养因子的情况,进一步探讨hUCMSCs对视网膜缺血再灌注损伤治疗的可能机制。方法 本课题分为两部分:第一部分取健康足月妊娠剖宫产新生儿的脐带,利用酶消化法获得原代细胞传至第三代备用;流式细胞仪检测其表面标志CD34-、CD45-、CD73+、CD105+、Anti-HLA-ABC、Anti-HLA-DR;将第3代hUCMSCs接种于完全培养基中,绘制其生长曲线及倍增时间;第二部分用前房加压灌注法制作实验性大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,将96只健康SD大鼠随机分为对照加PBS组(C+P)、对照加细胞组(C+M)、缺血再灌注加PBS组(I/R+P)和缺血再灌注加细胞组(I/R+M),损伤后立即向(C+P)组和(I/R+P)组大鼠玻璃体腔内注入5μlPBS,(C+M)组和(I/R+M)组大鼠玻璃体腔内注入第三代hUCMSCs悬液5μl,每组按移植时间不同分为移植后两周组和四周组,于相应时间点过度麻醉处死动物,摘取实验眼视网膜低温冰冻保存,采用半定量RT-PCP(RT-PCR)和WesternBlot技术进一步检测不同处理组视网膜中bFGF、BDNF和CNTF的mRNA和蛋白的表达情况。
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