目的：用已经建立的放线菌素D致V79细胞凋亡模型，观察凋亡进程中不同时段的支细胞培养液培养正常细胞(旁观者细胞)引起的旁观者效应情况,为后续旁观者效应机制研究和旁观者因子的筛选提供实验基础资料。 方法：用最适剂量4mg/L放线菌D处理V79靶细胞1h(最佳时间)开始计时,分别在第4h、8 h,12 h和2h取靶细胞去细胞培养液(CM),培养正常细胞24 h后,进行旁观者效应的观察。倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法测定细胞存活率;细胞遗传学实验观察染色体损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡、坏死和细胞周期的改变；透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化。 结果：4h时段CM培养旁观者细胞数量大量减少、间隙增大、细胞变圆,脱壁增多；随时段延后改变减轻;MTT试验发现不同时段CM培养正常细胞。存活率在4-12h逐渐增加;染色体损伤以加入4h无细胞培养液诱导旁观者细胞损伤的作用最强。随后CM时段的延长,损伤逐渐减轻,畸变类型以断裂为主,伴有少量环形染色体、碎片和双着丝粒染色体；随着时段的延后,凋亡率逐渐减低，而各组坏死率变化不大；旁观者细胞主要死亡类型是凋亡。电镜观察发现靶细胞凋亡现象明显,出现细胞皱缩,染色质成团块状改变；4hCM处理组细胞发生染色质固缩,出现"吐泡"现象；8hCM组多数细胞出现染色质边集,聚集成块；12hCM组个别细胞染色质边集；24hCM组细胞有凋亡小体形成。 结论：凋亡模型的4 h时段无细胞培养液(CM)诱导旁观者细胞损伤的作用最强，并随着时段的延后逐渐减弱,而24h时段又增强，死亡类型以凋亡为主。