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目的:膝关节是运动损伤发生率最高的部位之一,在膝关节运动损伤关节囊积液患者康复治疗前后,通过基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOFMS)对血清蛋白标志物进行鉴定,寻找与康复治疗积极响应的炎性因子,分析其表达量变化,进一步筛选具有临床意义的关键蛋白质,并对其在膝关节损伤中的抗炎效应进行生理和病理机制分析,为相关诊疗提供依据。方法:6名膝关节运动损伤关节囊积液患者(5名男性和1名女性,平均年龄28.6±5.5,BMI22.5±1.6),收集治疗前及康复治疗后复查时的静脉血5mL,分离血清样本。分别取30μL血清样本放入1mL无核酸酶的无菌离心管,去除白蛋白、球蛋白、盐离子及脂质。使用优化的蛋白质组双向凝胶电泳分离蛋白:第一向等电聚焦,使用pH3-10ML(17cm)胶条,上样体积300μL(含总蛋白质300μg);50V主动水化12h,梯度升压500V2h、700V1h、1000V1h、2000V1h、4000V1h、8000V1h、8000V60000Vh;分别使用含有DTT和IAA的平衡缓冲液对IPG胶条平衡15min。将平衡好的胶条转入垂直电泳槽中进行第二向电泳,SDS-PAGE浓度12%,10mA/ge11h,30mA/ge15h。凝胶用10%乙酸溶液固定1h,考马斯亮蓝染色。通过UMAX透射扫描仪扫描获得双向电泳图谱(300dpi),利用PDQuest8.0对康复治疗前后的蛋白表达谱进行差异分析。对发生差异表达的血清蛋白标志物进行串联质谱鉴定,利用Swiss-Prot蛋白数据库进行PMF比对鉴定和功能查询。结果:通过优化的蛋白质组技术,获得了膝关节运动损伤关节囊积液患者,在康复治疗前后的血清蛋白质组表达谱,检测到治疗前后表达蛋白656个,图谱分析比对后获得积极响应康复治疗的差异表达蛋白21个,均包含在前期研究中获得的健康人群与膝关节运动损伤关节囊积液人群的52个差异蛋白表达库中,响应蛋白涉及细胞结构、细胞抗炎、细胞代谢合成酶类、信号转导、蛋白辅助折叠等多种功能。结论:膝关节运动损伤关节囊积液患者康复治疗前后血清蛋白质组发生了较为显著的差异表达,高通量复筛得到21个涉及多种细胞功能,且对康复治疗积极响应的蛋白,其中分子伴侣蛋白、抗炎因子可能以不同方式参与了抗炎治疗及机体修复,为监控和诊断膝关节运动损伤关节囊积液患者的康复水平及抗炎机制研究提供蛋白分子水平的依据。