本实验旨在研究利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便于用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,在大肠杆菌pQE 40原核表达系统中表达出重组atpA抗原,随后利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,再以纯化后的表达蛋白作为免疫原对两只新西兰长耳白兔进行常规免疫。收集兔血清后利用ELISA检测血清的效价来制备多克隆抗体,随后利用Protein A纯化抗体。利用得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性。结果表明两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1:20000和1:80000,Western blot检测表明制备的抗体能够与atpA蛋白进行特异性的结合。综上所述,本实验成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析。