【摘 要】
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目的:优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵条件.方法:通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶
【机 构】
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开平牵牛生化制药有限公司广东江门529339
【出 处】
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2013年核苷酸/核酸分离提取及衍生物开发利用新技术、新设备交流研讨会
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目的:优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵条件.方法:通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50L发酵罐发酵条件.结果:摇瓶培养时当起始pH值为7.0～7.2,于30℃培养4hr,加入终浓度为0.4mmol/1的IPTG诱导8hr后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量.IPTG诱导浓度和诱导开始时间对酶蛋白表达有显著影响.50L发酵罐正交试验显示IPTG诱导浓度和培养温度对蛋白表达量影响较大,试验结果显示50L发酵罐的最佳条件为:起始pH值为7.0～7.2,于32℃培4hr,加入终浓度为0.4mmol/1的IPTG诱导9hr后收获菌体,发酵结果:每升发酵液可得2g以上的酶蛋白.结论:基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产,为酶法合成核苷酸类似物奠定了基础.
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