【摘 要】
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骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是基因工程和细胞治疗的种子细胞之一,本研究利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体感染成年食蟹猴MSCs,探讨转染后GDNF在MSCs中的体外表达水平及其影响因素.首先,通过密度梯度离心法分离食蟹猴骨髓单核细胞(Marrow mono
【机 构】
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首都医科大学宣武医院细胞中心,北京 100053 首都医科大学宣武医院细胞中心,北京 100053
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骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是基因工程和细胞治疗的种子细胞之一,本研究利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体感染成年食蟹猴MSCs,探讨转染后GDNF在MSCs中的体外表达水平及其影响因素.首先,通过密度梯度离心法分离食蟹猴骨髓单核细胞(Marrow mononuclear cells,MNCs),体外培养食蟹猴MSCs.同时构建表达GDNF的慢病毒载体,并感染食蟹猴MSCs,分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-time PCR 方法,测定感染不同拷贝数病毒和不同转染组细胞GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平.实验结果显示,表达GDNF基因的慢病毒载体成功转染成年食蟹猴MSCs,体外培养的MSCs持续表达分泌GDNF.
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