【摘 要】
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目的：通过研究蛔虫感染小鼠骨髓前体树突状细胞(precursor dendritic cells,pDCs)刺激淋巴细胞增殖的作用及其细胞毒T淋巴细胞的毒性作用,探讨蛔虫感染小鼠pDCs的免疫刺激活性.方法：1.动物模型的建立：用灌胃方法建立人蛔虫-C57BL/6小鼠感染模型,按1000个/只剂量.2.实验分组：A-感染组DCs与感染组脾淋巴细胞混合培养;B—感染组DCs与未感染组脾淋巴细胞混合培
【机 构】
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江西省中医药大学附属医院 江西省中医药大学附属医院;南昌大学江西省医学科学研究所
【出 处】
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第一次全国中西医结合检验医学学术会议
论文部分内容阅读
目的：通过研究蛔虫感染小鼠骨髓前体树突状细胞(precursor dendritic cells,pDCs)刺激淋巴细胞增殖的作用及其细胞毒T淋巴细胞的毒性作用,探讨蛔虫感染小鼠pDCs的免疫刺激活性.
方法：1.动物模型的建立：用灌胃方法建立人蛔虫-C57BL/6小鼠感染模型,按1000个/只剂量.2.实验分组：A-感染组DCs与感染组脾淋巴细胞混合培养;B—感染组DCs与未感染组脾淋巴细胞混合培养;C—未感染组DCs与感染组脾淋巴细胞混合培养;E—用ABF冲击未感染组的DCs后与未感染组脾淋巴细胞混合培养;F—用B16肿瘤抗原冲击未感染组的DCs后与未感染组脾淋巴细胞混合培养;并设立一对照组D—未感染组DCs与未感染组脾淋巴细胞混合培养.通过MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况.共分为感染后1、11、34d三个时间段.3.DC的诱导培养及鉴定：无菌条件下制备小鼠骨髓细胞.培养体系中加入诱导分化因子培养其成为DCs,倒置显微镜下观察DCs的生长情况.用流式细胞术检测DCs表达CD80的情况,电镜观察DCs细胞形态.4.脾细胞的分离培养培养：常规无菌状态(详细见全文)制备小鼠脾细胞,调整细胞密度为1×106/ml,置37℃,5％CO2培养箱中培养.5.CTL细胞因子的表达：CTL用ELISA方法检测培养72h后收集的CTL上清中IL-2,TNF-α,IFNγ,IL-4,IL-10,IL-5的表达量.6.绘制B16细胞生长曲线：取对数生长期的B16细胞常规消化计数,准确将细胞分别接种于24孔培养板中,每日取3孔计数,连续观察7d.掌握靶细胞基本生长规律.7.CTL对B16细胞的影响：将CTL作为效应细胞,B16细胞作为靶细胞,通过MTI法检测CTL对小鼠黑色素瘤细胞株(B16)的影响.
结果：1.DCs培养不同阶段细胞分化程度和形态各异,培养7d后,细胞表面可见明显的树突状突起.透射电镜可见典型的DCs的形态特征.同时流式细胞术检测CD80处于高表达状态.其中感染小鼠CD80的表达为(74.53％±6.42％),未感染小鼠CD80的表达为(50.12％±3.25％).2.细胞增值情况在感染后1d,B组OD值高于D组;在感染后11d,B组OD值稍低于D组;在感染后34d,B组OD值稍高于D组.在三个时间段的任一时间段B、D组间OD值无显著性差异,在不同的时间段各组OD值具有显著性差异.3.细胞因子分泌情况,在感染后1d、1id B组CTL分泌的IL-4高于D组;在感染后34d,组CTL分泌的IL-4低于D组.在感染后1d,B组CTL分泌的IFN-γ高于D组;感染后11d、34d D组CTL分泌的IFN-γ高于B组.在不同时间段以及在同一时间段各组CTL分泌的IFN-γ和IL-4有显著性的差异.但在各时间段未检测出CTL有IL-2,IL-5,IL-10,TNF-α细胞因子的分泌.4.B16细胞从第2d开始进入对数生长期,在第5d生长最为旺盛,之后增殖减慢逐渐进入平台期.5.蛔虫感染34天时各组CTL对B16细胞的生长无抑制作用.
结论：①受感染小鼠pDCs具有免疫刺激的作用.②受感染小鼠pDCs能够刺激脾淋巴细胞增殖,随感染条件不同增殖率不同.③受感染小鼠pDCs诱导的CTL分泌的细胞因子IFN-γ和IL-4,随感染条件不同表达量不同.③本实验中,蛔虫感染小鼠34dpDCs诱导的CTL对靶细胞B16细胞株的生长无抑制作用.
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