论文部分内容阅读
目的 观察吴茱萸碱(EVO)对酵母多糖(ZYM)诱导急性腹膜炎的保护作用,并探讨其作用机制.方法 体内实验：将60只成年C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为对照组(20只,腹腔注射生理盐水)、模型组(20只,腹腔注射ZYM 50mg/kg)和EVO治疗组(20只,腹腔注射ZYM 50mg/kg和EVO 10mg/kg),各组分别于2h、6h、12h和24h处死5只小鼠,采集血清和腹腔灌洗液.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和腹腔灌洗液中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、CXCL-1和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的含量；运用细胞计数仪检测腹腔细胞总数；利用流式细胞仪检测中性粒细胞比例.体外实验：将25只成年C57BL/6小鼠腹腔注射1ml 4％巯基肉汤,于第4天收集小鼠腹腔巨噬细胞,并将其分为对照组(生理盐水)、ZYM组(ZYM 100μg/ml)、ZYM+EVO组(ZYM 100μg/ml和EVO 50μM)和EVO组(EVO 50μM).利用Western Blot检测药物作用30min时细胞核内核转录因子-κB (NF-κB) p65的含量；RT-PCR法检测药物作用2h时细胞中TNF-α、IL-6、CXCL-1、MIP-2的mRNA的表达水平；ELISA检测药物作用12h时细胞上清中TNF-α、IL-6、CXCL-1、MIP-2的含量,同时将各组上清通过Transwell小室培养中性粒细胞并检测其迁移情况.结果 体内,EVO能有效降低ZYM诱导后不同时间(2h、6h、12h和24h)小鼠血清和腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6、CXCL-1、MIP-2的含量,减少腹腔总细胞及中性粒细胞数目；体外,与ZYM单独处理的腹腔巨噬细胞相比,EVO可显著减少TNF-α、IL-6、CXCL-1、MIP-2的mRNA和蛋白水平,降低核内NF-κB p65蛋白表达.Transwell实验显示ZYM与EVO联合作用下的巨噬细胞培养上清对中性粒细胞迁移的诱导能力显著低于ZYM单独刺激组.结论：吴茱萸碱可能通过抑制ZYM诱导的巨噬细胞内NF-κB入核,降低炎症因子及趋化因子的合成和释放,减少腹腔中性粒细胞的迁移,进而减轻腹腔炎症.