【摘 要】
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目的：验证Tet-on诱导表达系统的原理及其功能和诱导物DOX不同添加剂量对细胞增殖的影响.方法：本实验利用pTRE-tight和pdsred-Express2-N1构建带有红色荧光蛋白基因(red fluorescence protein,RFP)的载体pTRE-DSred,使之与另一载体pTet-on共转染293T细胞,加入不同浓度(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院,广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,广东广州510642;河南牧业经济学院动物科技学院,河南郑州450046
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会暨饲料饲草学分会2015年度学术交流会
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目的：验证Tet-on诱导表达系统的原理及其功能和诱导物DOX不同添加剂量对细胞增殖的影响.
方法：本实验利用pTRE-tight和pdsred-Express2-N1构建带有红色荧光蛋白基因(red fluorescence protein,RFP)的载体pTRE-DSred,使之与另一载体pTet-on共转染293T细胞,加入不同浓度(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的DOX诱导,然后在荧光显微镜下观察是否有红色荧光.
结果：实验过程中构建了载体pTRE-DSred质粒,并与pTet-on质粒共转染293T细胞,在细胞培养液中分别添加0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml DOX,48h后均有红色荧光蛋白的表达,但浓度为10μg/ml实验组中红色荧光蛋白的表达水平明显低于其它两个实验组;未添加DOX诱导实验组中红色荧光蛋白表达水平极低;对照组中未观察到红色荧光蛋白的表达;RT-PCR结果显示在四个实验组均检测到RFP基因的转录.
结论：本实验验证了四环素基因诱导表达调控系统的功能,在DOX存在时,红色荧光蛋白基因可以顺利表达,适宜的诱导浓度可实现目的基因的高水平表达,但该Tet-on系统存在低渗漏表达现象.
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