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目的:肿瘤是危害人类健康的重大疾病之一,目前临床治疗肿瘤的手段主要有放化疗和手术.放化疗存在着毒副作用大等缺点,手术治疗易复发.因此寻找疗效好且毒副作用小的药物迫在眉睫.课题组前期研究显示,怒江藤黄中分离得到的新化合物Nujiangexathone A(NJXA)在宫颈癌细胞株中具有细胞毒性,但其作用机制尚不明确.本论文通过现代分子生物技术,从分子、细胞、组织和器官水平深入阐明NJXA 抗宫颈癌作用的活性及其作用机理.方法:(1)MTT 及克隆形成实验检测NJXA 对细胞增殖的影响;(2)免疫荧光实验观察NJXA 对线粒体行态的影响;(3)流式细胞技术检测NJXA 对细胞凋亡及细胞周期的影响;(4)Western blot 检测细胞周期相关蛋白及凋亡相关蛋白;(5)RT-PCR 检测相关基因mRNA 的表达水平;(6)蛋白质组学探究NJXA 可能的蛋白靶点;(7)si-RNA 基因沉默技术验证靶蛋白的生物活性;(8)裸鼠移植瘤模型考察NJXA 在裸鼠体内的抗肿瘤活性.结果:(1)NJXA 浓度和时间依赖性降低HeLa 和Siha 细胞的活性;(2)NJXA 激活线粒体介导的Caspase 依赖性细胞凋亡;(3)NJXA 通过下调细胞周期相关蛋白Cyclins B1,E1,和CDK2、4 和6 来诱导G0/G1 期细胞周期阻滞;(4)蛋白质组学结果显示,经NJXA 干预过的HeLa 细胞,有30 个蛋白发生了改变,其中12 个蛋白表达上调、18 个蛋白表达下调,其中hnRNPK 蛋白下调了5.5 倍;(5)在si-RNA 敲除hnRNPK 蛋白的细胞中,细胞的生长得到抑制;(6)NJXA 通过泛素化蛋白酶体途径下调hnRNPK 蛋白的表达,而对其基因表达水平无影响;(7)在裸鼠移植瘤模型中,NJXA 显著抑制肿瘤生长,下调肿瘤组织中Ki-67及hnRNPK 蛋白的表达且无明显的器官毒性.结论:Nujiangexanthone A 通过泛素化蛋白酶体途径降低hnRNPK 蛋白的表达,进一步通过下调c-Myc-Cyclins/Cdks-Rb-E2F1 通路,从而诱导宫颈癌细胞周期阻滞而发挥抗肿瘤作用,其为新型抗宫颈癌药物的开发提供了可行的指导依据.