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目的：探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响.方法：用不同浓度5-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo.应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达.结果：Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μM5-Aza-CdR处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调,实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000),(1.171±0.126),(1.356±0.085)和(1.422±0.090)；在LoVo细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000),(1.117±0.094),(1.273±0.062)和(1.285±0.070).Western blot检测MLH-1蛋白检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为(0.114±0.033),(0.365±0.040),(0.831±0.041)和(0.849±0.051)；LoVo细胞株相对表达量分别为(0.602±0.020),(0.621±0.028),(0.934±0.029)和(1.057±0.045).以上作用均呈时间、剂量依赖性,MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达(F=8.918,P=0.010)和LoVo细胞株表达(F=8.351,P=0.011)具有统计学意义.MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达(F=226.825,P=0.000)和LoVo细胞株表达(F=153.642,P=0.000)亦具有统计学意义.结论：结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因.5-Aza-CdR能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达.