【摘 要】
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目的:选取miR-369-3p和miR-483-5p作为研究对象,研究其在NSCLC转移中的作用及其机理。方法:应用real-time PCR验证了miR-369-3p在L9981/ NL9980和95D/95C细胞中的差异表达水平,通过划痕实验、Boyden chamber侵袭实验、MTT实验分别检测了它对肿瘤细胞迁移能力、侵袭能力及增值能力的影响,并通过生物信息学方法预测了miR-369-3p
【机 构】
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四川大学华西医院胸外科 四川大学华西医院肿瘤中心 四川省肺癌分子重点实验室 天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室
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目的:选取miR-369-3p和miR-483-5p作为研究对象,研究其在NSCLC转移中的作用及其机理。方法:应用real-time PCR验证了miR-369-3p在L9981/ NL9980和95D/95C细胞中的差异表达水平,通过划痕实验、Boyden chamber侵袭实验、MTT实验分别检测了它对肿瘤细胞迁移能力、侵袭能力及增值能力的影响,并通过生物信息学方法预测了miR-369-3p的靶基因,应用荧光报告基因系统初步验证了miR-369-3p的靶基因。此外,应用real-time PCR验证了miR-483-5p在L9981/NL9980细胞中的差异表达水平,并进一步通过boyden chamber侵袭实验检测了它对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果:1.高转移人肺大细胞肺癌细胞株L9981中miR-369-3p的相对表达水平较低转移人肺大细胞肺癌细胞株NL9980中高2.1倍.2.增加miR-369-3p在低转移能力的NL9980中的相对表达,能够显著促进NL9980细胞的迁移能力.3.降低miR-369-3p在高转移能力的L9981中的表达水平,能够显著降低L9981细胞的侵袭能力;相反,增加miR-369-3p在低转移能力的NL9980中的表达水平,能够显著促进NL9980细胞的侵袭能力.4.增加miR-369-3p在低转移能力的NL9980中的表达水平,对NL9980细胞的增殖能力没有显著影响.5.生物信息学预测WSB1可能是miR-369-3p的靶基因。6.0荧光报告基因系统证明miR-369-3p通过WSB1的3UTR来抑制WSB1基因的表达,推测WSB1可能是miR-369-3p的靶基因。7.高转移潜能人肺大细胞肺癌细胞株L9981细胞株中miR-483-5p的表达水平显著低于低转移潜能人肺大细胞肺癌细胞株NL9980细胞株.8.L9981-miR-483-5p-mimics细胞株体外侵袭能力显著低于L9981和L9981-miR-483-5p-control,但L9981-miR-483-5p-control与L9981细胞株间体外侵袭能力比较无显著性差异.结论:人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中存在miR-369-3p的过表达;miR-369-3p在L9981细胞中的表达可能与L9981细胞的迁移能力和侵袭能力相关,而对细胞的增殖能力没有显著影响;miR-369-3p可能通过WSB1基因参与调节L9981的迁移和侵袭;人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞中存在miR-483-5p的低表达;外源性miR-483-5p能显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981体外侵袭能力。
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