论文部分内容阅读
目的:本研究拟构建检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)病原的二重液相芯片(Diplex xMAP Array)检测方法,为常见猪病的快速高通量鉴别诊断搭建新技术平台。方法:根据GenBank中公布的PPV结构蛋白VP2的基因及PCV2全基因序列,用DNAman V6进行多序列比对分析,筛选出保守区后用Beacon Designer’7.9设计出PPV和PCV2的特异性探针、5I物及探针互补序列,探针与微球偶联,下游弓I物和探针互补序列标记生物素;采用不对称性二重PCR扩增靶序列,PCR特异性和敏感性产物与偶联验证成功的探针杂交,杂交结果用液相芯片仪检测;应用建立的芯片方法检测20份临床样品,并与PCR检测结果做比较。结果:通过条件优化,建立了PPV和PCV2的二重液相芯片检测方法,引物和探针与其他病毒没有交叉,特异性好,对PPV和PCV2基因拷贝数检测下限分别为7.66×103个、1.29 × 102个;用该方法与普通PCR方法对临床20份样品的检测,结果100%一致。结论:本研究建立了PPV和PCV2的二重液相芯片检测方法,且该方法敏感特异,临床检测良好,适于推广应用。