【摘 要】
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目的:汉防己甲素促缺血组织血管新生作用研究,并探讨其可能的分子机制.方法:采用定量PCR和ELISA的方法,检测汉防己甲素(TET)对H9c2细胞和MEF细胞VEGF基因及蛋白表达的影响.应用小鼠后下肢缺血模型,采用激光多普勒和免疫组化的方法观察TET对缺血后下肢血流和毛细血管密度的影响;应用小鼠心肌缺血(MI)模型,超声心动检测心功能,lectin/BrdU免疫组化检测心脏缺血边缘区毛细血管密度
【机 构】
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天津中医药大学中医药研究院;西北大学芬伯格心血管研究所 天津中医药大学中医药研究院
【出 处】
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中华医学会第十五次全国心血管病学大会
论文部分内容阅读
目的:汉防己甲素促缺血组织血管新生作用研究,并探讨其可能的分子机制.方法:采用定量PCR和ELISA的方法,检测汉防己甲素(TET)对H9c2细胞和MEF细胞VEGF基因及蛋白表达的影响.应用小鼠后下肢缺血模型,采用激光多普勒和免疫组化的方法观察TET对缺血后下肢血流和毛细血管密度的影响;应用小鼠心肌缺血(MI)模型,超声心动检测心功能,lectin/BrdU免疫组化检测心脏缺血边缘区毛细血管密度;采用mRNA稳定性和胞外细胞核转录发生实验考察TET上调VEGF mRNA表达的分子机制.结果：定量PCR实验表明，TET可以浓度依赖性上调VEGF mRNA表达(TET作用6小时，与对照组相比，汉防己甲素10-8M,10-7M,10-6M分别可以上调VEGF mRNA 1.5，1.7以及2.3倍，p<0.05,n=3)。预孵育汉防己甲素(10-6M) 24小时，可以增加细胞上清液VEGF蛋白表达6倍(ELISA,TETvs.Vehicle:176.4±9.1vs.33.5±4.5，p<0.001，n=6)。TET(1×10-6)可以上调大鼠原代心肌细胞以及小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)VEGF mRNA表达。应用小鼠后下肢缺血模型，分别在第7,14,28天，TET可增强小鼠缺血后下肢血流。在术后第7天和14天定量PCR及Western-blot检测发现，TET可以增强小鼠缺血后下肢肌肉组织VEGF mRNA和蛋白表达。免疫组化检测发现TET可增强小鼠缺血后下肢毛细血管密度。TET增强小鼠MI术后心功能，减小小鼠MI术后28天梗塞面积。Lectin/BrdU免疫组化染色发现TET可增强小鼠MI术后缺血边缘带毛细血管密度。mRNA稳定性实验和胞外细胞核转录发生实验表明，TET不影响VEGF mRNA稳定性而是增强VEGF mRNA转录的发生。结论：汉防己甲素通过上调VEGF表达促进缺血组织血管新生。
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