【摘 要】
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人骨形态发生蛋白-7(Human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)又名成骨蛋白-1 (Osteogenic Protein,OP-1),是一种重要的成骨生长因子,其在肾脏的形态发生中亦起重要
【机 构】
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山东省医学科学院济南大学医学与生命科学学院山东省医药生物技术研究中心,济南250062
【出 处】
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华东六省一市生物化学与分子生物学会2015年学术交流会
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人骨形态发生蛋白-7(Human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)又名成骨蛋白-1 (Osteogenic Protein,OP-1),是一种重要的成骨生长因子,其在肾脏的形态发生中亦起重要作用,被称为重要的"肾脏形态发生源".hBMP-7基因编码一个含有139个氨基酸残基的成熟肽,其活性形式是一种二聚体糖蛋白,单体或无糖基化的hBMP-7没有生物活性或生物活性很低.本实验室前期研究表明大肠杆菌表达的hBMP-7生物活性很低,复性困难.本实验拟以人源癌细胞U2-OS作为表达系统,利用人源癌细胞快速增殖及高效的翻译后修饰系统的特性来表达hBMP-7.实验以pcDNA3作为载体,以不带自身信号肽的含有453个碱基对的rhBMP7基因序列作为目的基因,构建hBMP-7表达载体(rhBMP7-pcDNA3),利用BamHI与HindⅢ进行双酶切验证;再以Lipofectamine2000作为转染介质将其转染导入U2-OS细胞;利用RT-qPCR检测hBMP-7基因在U2-OS细胞中的转录.双酶切结果显示rhBMP7-pcDNA3构建成功;RT-qPCR检测结果以2^(-△△Ct)值表示:rhBMP7-pcDNA3组其均值为0.0075,pcDNA3组其均值为0.8285,表明rhBMP7-pcDNA3组hBMP-7基因成功转入U2-OS细胞并可转录表达.
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