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A族链球菌(GAS)感染可以引起宿主严重的病变,资料表明,GAS具有逃避宿主免疫攻击的能力。巨噬细胞是抗感染的重要力量,细胞因子分泌是巨噬细胞活化的一种形式,进一步诱导炎症反应以清除病原体。我们以前的实验结果提示,以同等菌量的A族链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别刺激小鼠巨噬细胞 RAW264.7,GAS诱导巨噬细胞产生的多种细胞因子较其它两种菌呈现表达低下或产生高峰迟滞现象。细胞因子信号抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)是巨噬细胞内细胞因子调节的负反馈分子,可通过Ⅰ型干扰素及其受体结合而诱导表达,Ⅰ型干扰素与其受体的结合激活受体相关的酪氨酸激酶(JAK-1 and Tyk2),随后STAT被磷酸化激活,磷酸化的STAT进入细胞核,活化SOCS-1靶基因,表达SOCS-1蛋白。资料显示,许多微生物可以利用SOCS-1蛋白进行免疫逃逸,如细胞内寄生的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii),利什曼原虫(Leishmania)和肺炎伯克氏菌(Burkholderia pseudomallei)等可以通过诱导细胞SOCS-1蛋白表达进而免疫逃逸。为了进一步探索GAS感染发生免疫逃逸的机制,对GAS感染巨噬细胞表达SOCS-1进行了不同时间段的测定,并通过抗体阻断,免疫共沉淀(IP)和免疫荧光等检测方法对GAS感染巨噬细胞高表达SOCS-1的机制进行研究,以期进一步了解GAS逃避巨噬细胞免疫攻击的分子机制。目的:通过GAS感染巨噬细胞高表达SOCS-1机制的研究,以此进一步了解GAS发生免疫逃逸的分子机制。方法:Real-Time PCR和Western blot检测感染GAS的巨噬细胞的SOCS-1的表达情况及检测IFN-β阻断与未阻断状态下GAS刺激 RAW264.7细胞后SOCS-1的表达情况;应用 Real-Time PCR方法检测感染GAS巨噬细胞表面TLR4阻断前后SOCS-1的表达情况;免疫共沉淀和免疫荧光检测巨噬细胞中MYD88分子和JAK1,STAT1的结合状况;结果:GAS感染小鼠巨噬细胞6小时后诱导SOCS-1基因表达达到高峰,较正常增高11.78倍;通过对GAS刺激巨噬细胞产生IFN-β进行抗体阻断测定发现,但SOCS-1表达并不依赖于IFN-β的作用;对GAS和作为对照的热灭活GAS感染巨噬细胞1,2,3,6小时进行了TLR2和TLR4的检测,GAS感染巨噬细胞3小时后TLR4可以升高8倍左右,而巨噬细胞表面的TLR2在表达量没有变化;通过TLR4的特异性阻断发现感染6小时后巨噬细胞SOCS-1表达大幅降低;通过免疫共沉淀实验发现TLR的接头蛋白MYD88分子和JAK1,STAT1蛋白以复合体形式天然存在于小鼠巨噬细胞中;GAS和热灭活的GAS刺激巨噬细胞1,2,3,4小时发现,GAS组在刺激2小时时,JAK1的磷酸化达到高峰,STAT1在刺激3小时时达到高峰,而热灭活组没有变化。结论:GAS感染小鼠巨噬细胞诱导SOCS-1大量表达;GAS感染巨噬细胞SOCS-1表达主要通过TLR4/MYD88直接诱导产生。