【摘 要】
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以银耳Tr21菌株的芽孢为材料,利用RNAiso Reagent试剂盒地提取银耳芽孢总RNA, 0ligotex mRNA Purification Kit精制得到mRNA,用cDNA Synthesis Kit将mRNA反转录合成双链c
【机 构】
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福建农林大学菌物研究中心,福建福州350002
【出 处】
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中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会
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以银耳Tr21菌株的芽孢为材料,利用RNAiso Reagent试剂盒地提取银耳芽孢总RNA, 0ligotex mRNA Purification Kit精制得到mRNA,用cDNA Synthesis Kit将mRNA反转录合成双链cDNA.通过CHROMA SPIN+TE-1000去短片段的cDNA与载体pBluescript Ⅱ SK(+)连接,电转化(1.5KV,200Ω,25μF)导入宿主细胞大肠杆菌DH10B中,构建了银耳芽孢cDNA文库.利用T7和T3两个引物对随机挑取的16个单菌落进行PCR扩增.结果表明：银耳芽孢cDNA文库的重组率为100％,平均插入片段约为1300bp,文库的库容约为7.5×106 cfu,达到建库要求.通过密码子在线分析软件CodonW和CUSP对经过测序获得的80条蛋白编码序列(Coding DNA Sequence,CDS)进行分析,统计了银耳密码子同义密码子相对使用度(Relative Synonymous Codon Usage,RSCU)和同义密码子相对使用频率(Relative Frequency of Synonymous Codon,RFSC),确定了银耳蛋白编码基因的18个高频密码子.分析结果还显示,银耳基因的G+C含量为59.02％,其中密码子第三位碱基的G+C含量高达69.72％,说明银耳基因偏爱以G或C结尾的密码子.
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