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枯萎病是节瓜主要病害之一。创制抗病资源,发掘抗性相关基因并进行抗性机理研究,对于节瓜抗病育种具有重要意义。本课题组前期研究中在节瓜抗枯萎病品系中发现部分抗性相关序列属于WRKY转录因子家族成员,并克隆出该WRKY基因,命名为CqWRKY2。拟克隆节瓜WRKY基因并了解其表达与节瓜枯萎病抗性的关系,旨在发掘枯萎病抗性相关基因,揭示枯萎病抗性分子机理,并为节瓜抗枯萎病育种提供参考。根据冬瓜转录组文库设计WRKY引物,以eDNA为模板克隆出目的片段后,转化大肠杆菌,利用蓝白斑筛选菌落和PCR挑选阳性克隆,测序,获得节瓜WRKY基因。以抗枯萎病自交系A39FA和感病自交系H5为材料,在两片真叶时分别用枯萎病毒素镰刀菌酸(FA)处理6、12和24 h,利用Real-time PCR检测不同胁迫时间节瓜WRKY基因的表达情况以节瓜eDNA为模板克隆出9个节瓜WRKY基因,分别命名为CqWRKY23、CqWRKY53、CqWRKY50、CqWRKY54、CqWRKY34、CqWRKY31、CqWRKY45、CqWRKY21和CqWRKY37。生物信息学分析表明CqWRKY23、CqWRKY37属WRKY一类转录因子,CqWRKY53、CqWRKY54、CqWRKY45和CqWRKY21属WRKY二类转录因子,CqWRKY50、CqWRKY34和CqWRKY3 1属WRKY三类转录因子。利用Real-time PCR检测FA胁迫6、12和24 h后CqWRKY2和本次克隆的9个节瓜WRKY基因的表达情况,结果表明10个WRKY基因在FA处理后表达量都有显著提高,其中CqWRKY2、CqWRKY23、CqWRKY53、CqWRKY31和CqWRKY37的表达量在抗感材料间存在显著差异。进一步分析发现,CqWRKY31在抗病材料中的表达量极显著高于感病材料,在FA胁迫6 h时表达量达到最高,CqWRKY37在FA胁迫12 h时抗病材料表达量显著高于感病材料,认为其可能为枯萎病抗性正调节子。而CqWRKY2、CqWRKY23和CqWRKY53在感病材料中具有更高表达量,其中CqWRKY2和CqWRKY53均在12 h时表达量达到最高峰,CqWRKY23在6 h时表达量最高,暗示这3个基因可能是枯萎病抗性的负调节子。