【摘 要】
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构建并原核表达Hsp70-HSV2gD融合蛋白。将Hsp70和HSV-2gD蛋白基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建成重组质粒pGEX-4T-Hsp70-gD,并测序鉴定。重组质粒pGEX-4T- Hsp70-gD
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.30371290),广东省医学科研基金资助课题(No.A2006492).
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构建并原核表达Hsp70-HSV2gD融合蛋白。将Hsp70和HSV-2gD蛋白基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建成重组质粒pGEX-4T-Hsp70-gD,并测序鉴定。重组质粒pGEX-4T- Hsp70-gD转化大肠杆菌DH5α后,IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE分析。表达产物纯化后做West- ern blot检测。将其肌注免疫BALB/c小鼠,检测融合蛋白对免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、γ-干扰素产生以及血清中gD IgG水平的影响。表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为118KD处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。用GST柱得到了纯化的Hsp70-HSV2gD融合蛋白。Western blot证实,表达产物具有良好的活性。GST-Hsp70-gD组蛋白疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞刺激指数和脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其他组(p<0.05)。血清单纯疱疹病毒-2gD蛋白的抗体水平高于其他组(P<0.05)。本研究成功表达了Hsp70-HSV2gD融合蛋白,该蛋白可诱发免疫应答,为其进一步的研究打下了基础。
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