【摘 要】
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目的 探讨百草枯(PQ)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)细胞毒性中microRNA(miR)的表达变化及bcl-2的调控机制.方法 以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型,PQ 62.5 iμmol·L-1分别诱导PC12细胞24 h,用微列阵芯片技术筛选变化显著的miRNA,实时荧光定量逆转录-聚合酶连反应(Real Time PCR)进行验证；根据microRNA数据库(Target
【机 构】
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宁夏医科大学公共卫生学院劳动卫生与职业病教研室,甘肃银川750004 复旦大学公共卫生学院/教育部
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目的 探讨百草枯(PQ)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)细胞毒性中microRNA(miR)的表达变化及bcl-2的调控机制.方法 以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型,PQ 62.5 iμmol·L-1分别诱导PC12细胞24 h,用微列阵芯片技术筛选变化显著的miRNA,实时荧光定量逆转录-聚合酶连反应(Real Time PCR)进行验证；根据microRNA数据库(TargetScan 5.1)提供的靶标预测分析结果,搜寻其相关的靶标；用终浓度为PQ 62.5,125,250,500和1000 μmol· L-1处理细胞24 h,Annexin Ⅴ-FITC/PI法流式细胞仪测定细胞凋亡,RT-PCR测定miR-34a,miR-Let-7e的相对表达水平,Western blot测定bcl-2蛋白表达水平.结果 与对照组比较,PQ 125,250,500和1000 μmol·L-1)作用PC12细胞24 h后,细胞存活率显著降低；细胞凋亡率显著上升,且呈现剂量依赖方式(P＜0.05)；基因芯片技术显示,PQ 62.5μmol·L-1作用于PC12细胞24 h引起8个miRNA表达下调,11个miRNA表达上调；其中miR-34a上调、miR-Let-7e下调最为明显(P＜0.01)；RT-PCR显示,随着PQ浓度的增加,miR-Let-7e表达水平持续下降,miR-34a表达水平持续上升,与芯片结果一致；bcl-2蛋白表达水平随着PQ染毒剂量的增加明显降低,且与miR-34a的表达量呈负相关(P＜0.05).结论 miR的异常表达参与了PQ致PC12细胞损伤过程.PQ可能通过上调miR-34a表达增加bcl-2蛋白表达,进而诱导PC12细胞凋亡.
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