目的 :分离新生大鼠原代心肌细胞(NRVMs),低氧工作站建立该细胞物理法缺氧模型。方法 :取出生3日内Wistar大鼠心脏,胶原酶消化及Percoll密度梯度离心法分离NRVMs,免疫荧光检测心肌细胞特异性肌钙蛋白I(c Tn I),鉴定心肌细胞。利用DWS H35低氧工作站进行细胞缺氧处理,MTT比色法检测缺氧不同时间NRVMs增殖活力变化;LDH法检测细胞缺氧损伤情况;Hoechst 33342染色观察细胞凋亡形态学变化;免疫印迹检测Hif-1α表达情况。结果 :Percoll梯度密度离心法分离出的NRVMs纯度较高,存活率大于95%,可用于后续实验;与对照组相比,缺氧处理组细胞活力明显下降(P<0.05),LDH明显增加(P<0.05),且NRVMs细胞增殖活力下降程度及LDH增加程度均随缺氧时间延长更加明显;Hoechst 33342染色显示NRVMs缺氧6h开始出现明显的核变形、固缩、碎裂、蓝色浓染等典型的凋亡形态学变化,且随缺氧时间延长该变化更为明显;免疫印迹显示Hif-1α随缺氧时间延长,表达量逐渐增加。结论 :Percoll密度梯度离心法可获得纯度较高的NRVMs;应用低氧工作站可以建立稳定的NRVMs缺氧模型。