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目的：探讨培美曲塞治疗表皮生长因子酪氨酸激酶耐药的非小细胞肺癌的逆转作用及其分子机制。方法：应用MTT法测定吉非替尼敏感和PC9衍生的三株吉非替尼耐药株对吉非替尼的IC50;用MTT法测定吉非替尼敏感和PC9衍生的三株吉非替尼耐药株，以及T790M突变细胞NCI-H1975对培美曲塞的IC50;应用Western blot检测培美曲塞给药后MET/PI3K/AKT通路相关蛋白在不同细胞株间表达水平的差异;应用肺癌移植瘤肿瘤组织制备原代细胞株，测定移植瘤原代培养细胞株吉非替尼的IC50，比较培美曲塞组和生理盐水组原代细胞的IC50.结果：PC-9,PC-9/AB11,PC-9/BB4和PC-9/AB2肺癌细胞株对吉非替尼的耐药指数经F检验具有显著性差异;PC-9,PC-9/AB11,PC-9/BB4和PC-9/AB2四株肺癌细胞株MET基因mRNA表达水平经F检验有显著性差异;培美曲塞3umol/L处理AB11,AB2,BB4细胞株48小时后细胞的迁移能力下降，NCI-H1975细胞的迁移没有发生明显改变;经Real time PCR验证，与培美曲塞处理前比较，培美曲塞处理PC9/AB11,PC9/AB2和PC9/BB4肺癌细胞株48小时后，PI3KCA,MAP3K2,MAP3K5基因mRNA表达水平均有显著性下调。结论:吉非替尼敏感与吉非替尼获得性耐药肺癌细胞株间对吉非替尼的IC50,RI、细胞凋亡率，以及体外增殖能力均存在显著性差异，这种差异可能与吉非替尼获得性耐药肺癌细胞株存在MET基因的过度表达有关。培美曲塞能显著降低吉非替尼获得性耐药肺癌细胞株移植瘤原代培养细胞株对吉非替尼的IC-50;对于具有MET基因扩增的获得性吉非替尼耐药肺癌细胞株，培美曲塞在体内外均能明显抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并促进凋亡，而对具有T790M突变的吉非替尼获得性耐药肺癌细胞株对培美曲塞耐药。