【摘 要】
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目的：通过与单纯的神经干细胞移植进行比较,探讨NEP 1-40基因修饰对神经干细胞移植后存活和分化的影响.方法 从孕18天的Wistar大鼠胚胎大脑皮质中分离获得原代神经干细胞,
【机 构】
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四川大学华西医院骨科,成都 610041
【出 处】
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海峡两岸骨科专委会学术交流会、抗震救灾五周年学术研讨会暨第十届华西国际骨科论坛
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目的：通过与单纯的神经干细胞移植进行比较,探讨NEP 1-40基因修饰对神经干细胞移植后存活和分化的影响.方法 从孕18天的Wistar大鼠胚胎大脑皮质中分离获得原代神经干细胞,进行体外培养及传代,取传第3代的神经干细胞采用Nestin免疫荧光染色进行鉴定.通过基因钓取方法合成NEP1-40目的基因,采用已体外成功构建的慢病毒载体将NEP1-40基因导入第三代神经干细胞内建立NEP1-40基因修饰的神经干细胞.将30只成年SD大鼠在胸9水平进行脊髓右侧半切后随机分为3组各10只(SCI组,NSCs组,NEP1-40-NSCs组),伤后第7天在损伤局部分别植入细胞培养液、神经干细胞及NEP1-40基因修饰的神经干细胞各5ul.另取10只仅行胸9椎板切除而不损伤脊髓设置为空白对照组.移植后8周取各组损伤段脊髓组织惊醒石蜡包埋切片,行相关组织细胞学检测,评价神经纤维再生情况及移植细胞的存活和分化情况.结果：术后8周Nestin免疫荧光染色结果显示：假手术组组几乎未见明显的荧光信号,SCI组仅可见少量散在的极微弱的荧光信号,而NSCs组及NEP1-40-NSCs组则均有较强的荧光信号.辣根过氧化物酶神经示踪结果：细胞移植后8周时SCI组损伤区阳性神经纤维数最少,NSCs组有所增多,NEP 1-40-NSCs组显著增多,假手术组则最多(P＜0.01)；脊髓损伤区NF-200及MBP免疫阳性细胞数：SCI组最少,NSCs组有所增多,NEP1-40-NSCs组显著增多,假手术组则最多(P＜0.01).GFAP免疫阳性细胞数：NSCs组最少,NEP1-40-NSCs组有所增多,SCI组最多(P＜0.01)；两个细胞移植组之间NF-200、MBP、GFAP三种免疫阳性细胞所占百分比无显著差异(P＞0.05).结论：NEP1-40基因修饰对神经干细胞移植后的分化无明显诱导性,但是能促进移植细胞的存活及分化和神经元轴突再生,为研究神经干细胞移植治疗脊髓损伤提供了新的思路.
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