论文部分内容阅读
本研究获得了猪Xist基因,并在Xist基因第1,4,5,6外显子上设计了4对anti-Xist siRNA,成功构建了靶序列与EGFP融合表达的靶质粒。筛选出了干扰效果最好的siRNA1,其对Xist基因表达的抑制效率为75%。用anti-Xist siRNA1显微注射激活后的猪克隆重构胚,发现注射20pM或80哪组对体外培养的猪克隆胚胎卵裂率和囊胚率无显著提高(p>0.05),但80μm组可显著提高克隆囊胚内平均细胞数(p<0.05)。以猪Xist基因序列为基础还设计了同源重组长、短臂,成功构建了敲除Xist基因的基因打靶载体。此载体为后续获得敲除Xist基因的细胞系,以及以此细胞系作为核移植的供核细胞来提高猪克隆的效率提供基础。