【摘 要】
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目的:获得高表达黄杆菌肝素酶II工程菌.方法:本文用一对特异性引物通过PCR从黄杆菌(Flavobacterium heparinum)基因组DNA中扩增出黄杆菌肝素酶Ⅱ(HpaⅡ)基因,经测序验证后插
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237
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目的:获得高表达黄杆菌肝素酶II工程菌.方法:本文用一对特异性引物通过PCR从黄杆菌(Flavobacterium heparinum)基因组DNA中扩增出黄杆菌肝素酶Ⅱ(HpaⅡ)基因,经测序验证后插入到含T 7 启动子的质粒pET-24a上构建表达载体,重组质粒转化E.coli BL21(DE3),以1mM IPTG进行诱导表达.结果:SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PA GE) 分析表明, 该工程菌可表达与预期大小相符的约88kD的融合表达蛋白,在20度和37度培养条件下分别得到上清和包涵体,包涵体表达量占全菌体蛋白20％ 以上,且复性后的包涵体肝素酶活性达500 Ul-1OD-1600.
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