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目的：
观察骨髓间充质干细胞(BMSC)与染矽尘大鼠肺泡上皮细胞(AEC)体外共培养后能否分化为AEC,并对激光共聚焦显微镜(LSCM)和倒置荧光显微镜两种观察方法进行比较.
方法：
分别采用全骨髓贴壁法、免疫粘附纯化法培养BMSC和AEC,再将BMSC和染矽尘大鼠AEC共培养作为实验组,同时设对照A组:BMSC和正常大鼠AEC共培养,对照B组:BMSC单独培养.显微镜下动态观察BMSC的形态变化,并分别于共培养的第4、第8天对BMSC进行水通道蛋白5(AQP5)和表面活性蛋白C(SP-C)的免疫荧光双重染色,用LSCM和倒置荧光显微镜观察不同组的BMSC两种荧光的表达情况,采用图文分析软件对两种荧光进行积分光密度(IOD)分析.
结果：
共培养后实验组和对照A组的BMSC逐渐从长梭形向立方形、多边形转化,第8天时变化较第4天更明显,但对照A组BMSC形态变化无实验组明显,而对照B组BMSC的形态一直无明显变化.LSCM和倒置荧光显微镜下可观察到:实验组和时照A组的BMSC在共培养第4和第8天均可见呈绿色荧光的AQP5和红色荧光的SP-C表达,且两种荧光第8天均较第4天强,但同一时间点的两种荧光强度对照A组均较实验组弱;对照B组的BMSC在各时间点均可见少量绿色荧光表达,无红色荧光表达.LSCM可以在更高倍镜下清晰地观察不同蛋白的表达及其在细胞内的分布情况.对各组荧光进行IOD分析:实验组和对照A组BMSC在共培养第8天时的两种荧光IOD值均较第4天高(P＜0.05);同一时间点实验组两种荧光的IOD均高于对照A组和对照B组(P＜0.05),而对照A组两种荧光的IOD又均高于对照B组(P＜0.05);倒置荧光显微镜的荧光IOD较LSCM的荧光IOD值高(P＜0.05),但两者的实验比较分析结果一致.
结论：
染矽尘大鼠AEC能有效诱导BMSC分化成AEC;用LSCM可更清晰地观察细胞不同蛋白表达情况,但其荧光IOD分析的结果与倒置荧光显微镜无差别.