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目的:在“干细胞具先天之精的属性,是先天之精在细胞层次的存在形式”、“精血同源”等理论的指导下,本研究运用补精生血法、补精滋阴法、补精壮阳法来探讨补肾益精法对骨髓间充质干细胞(MScs)增殖的影响及机制。
方法:运用全骨髓贴壁法分离、培养MSCs,运用MTT法筛选对MSCs增殖具有促进作用的益精中药的单体、有效成分及含药血清,并研究其最佳促增殖时间、浓度。以RT-PCR检测不同细胞因子mRNA表达;Real-timePCR检测mRNA表达;Western-blot检测蛋白表达;ELISA法检测培养上清液蛋白含量。
结果:10-44mol/LTHSG、10%何首乌含药血清诱导培养MSCs 72h后,可促进MSCs增殖,在此过程中,均明显促进细胞SCFmRNA表达。10-4mol/LTHSG明显促进膜结合型与可溶性两种SCF蛋白表达,10%何首乌含药血清明显促进可溶性SCF蛋白的分泌,与空白组、空白血清组相比有显著性差异。10%黄精含药血清诱导培养MSCs 72h后,可促进MSCs增殖,在此过程中,明显促进细胞G-CSF mRNA及G-CSF蛋白表达,与空白血清组相比有显著性差异。1mg/mL巴戟天多糖、10%菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,可促进MSCs增殖。在此过程中,1mg/mL巴戟天多糖明显促进细胞LIF、GM-CSF mRNA及LIF蛋白表达,10%菟丝子含药血清明显促进细胞BMP-2 mRNA表达,与空白组、空白血清组相比有显著性差异。
结论:10-4mol/L THSG可促进MSCs增殖,可能与其促进细胞SCFmRNA、膜结合型与可溶性两种SCF蛋白表达有关.10%何首乌含药血清可促进MSCs增殖,可能与其促进细胞SCF mRNA及可溶性SCF蛋白表达有关。 10%黄精含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进细胞G-CSFmRNA及G-CSF蛋白表达有关。10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进细胞BMP-2 mRNA表达有关。1mg/mL巴戟天多糖促进MSCs增殖的作用,可能与其促进细胞LIF、GM-CSF mRNA及LIF蛋白表达有关。本研究提示补肾填精中药可通过不同机制促进干细胞增殖,本结果为证明“精”的干细胞学说提供了充分的科学依据。