【摘 要】
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利用splicedbyoverlapextension(SOE)技术,PCR扩增牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESA丁-6的三串联基因mpb70-83-e6,分子克隆和重组表达了融合蛋白rM70-83-E6,并以此作为诊断抗
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001
【出 处】
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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会
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利用splicedbyoverlapextension(SOE)技术,PCR扩增牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESA丁-6的三串联基因mpb70-83-e6,分子克隆和重组表达了融合蛋白rM70-83-E6,并以此作为诊断抗原,通过对抗原包被浓度、一抗浓度以及二抗浓度等反应条件的优化,建立了间接ELISA方法.ELISA结果的判定标准为:样本OD490≥0.5为阳性,0D490＜0.4为阴性,介于0.5＞OD490≥0.4之间为可疑.应用所建立的间接ELISA方法检测67份PPD阳性血清和50份PPD阴性血清,并与PPD皮试方法进行了比较.结果表明,ELISA方法的阳性符合率为68.66﹪(46/67),阴性符合率为100﹪(50/50),与PPD皮试诊断方法的总符合率为82.05﹪(96/117).本研究所建立的ELISA方法具有很好的开发和应用前景.
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