【摘 要】
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通过RT-PCR反应扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒完整的HA基因并进行了克隆与序列分析.扩增的HA基因开放性阅读框架由1707个核苷酸组成,共编码568个氨基酸.HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF,含连续的碱性氨基酸,具有高致病性AIV HA基因裂解位点的序列特征.进一步构建了真核表达载体pcDNA-HA,通过与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室(江苏南京) College of Medici
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
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通过RT-PCR反应扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒完整的HA基因并进行了克隆与序列分析.扩增的HA基因开放性阅读框架由1707个核苷酸组成,共编码568个氨基酸.HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF,含连续的碱性氨基酸,具有高致病性AIV HA基因裂解位点的序列特征.进一步构建了真核表达载体pcDNA-HA,通过与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的293T细胞,收集假病毒上清,通过Western-blot证明HA蛋白能够整合到假病毒颗粒表面,通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后均能检测到Lac Z基因的表达,证实所构建的假病毒具有泛嗜性,能够进入细胞.成功构建了具有感染性的MuLV-HA假病毒体系,为研究鹅源禽流感病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法.
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采用鸡胚接种和细胞培养的方法从广西武鸣某鹅场患病鹅脑、肝、脾中分离到两株病毒,经RT-PCR、HA、HI试验等研究,该分离毒为鹅副粘病毒.该毒株对鸡胚半数致死量(ELD)为10/0.1ml,对鸡胚成纤维细胞的半数感染量(TCID)为10/0.1ml.根据鸡新城疫病毒毒力测定的标准,测定分离株最小致死量的鸡胚平均死亡时间(MDT)为38.8h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为2,将分离毒10
2002年徐镔蕊通过对自然发生骨髓细胞瘤病的蛋鸡经过病理组织学、免疫组化及PCR检测,首次发现蛋鸡J亚群禽白血病(ALV-J).本实验采用临床发病的蛋用型鸡的病料,过滤除菌后接种于用11日龄的SPF鸡胚制备的鸡胚成纤维细胞(CEF).用ALV-Jgp85特异性单抗进行间接荧光抗体法(IFA)检测接种的CEF,结果呈阳性.提取接种病料的CEF的总RNA作反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),在pol
利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV-Gx株进行培育,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱,使其成为弱毒株IBDV-Gt.从细胞适应毒中提取病毒dsRNA,通过反转录,使用Long-accurate PCR(LA-PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV-Gt基因组A节段全长cDNA的方法,得到一约3.30kb的片段.测序结果证明已获得3255bp的A节段全长,对vvIBDV-Gx株和
从圭亚那进口的金刚鹦鹉泄殖腔拭子中分离到一株新城疫病毒(ZPS),该毒株鸡胚平均致死时间(MDT)为55.2h,脑内致病指数(ICPI)为2.0静脉致病指数(IVPI)为2.57,表明该毒株属强毒株.根据从GenBank上查到的NDV融合蛋白(F)基因的序列,设计特异性引物,克隆了F基因5端部分核酸序列,由此推导了F蛋白的氨基酸序列,并对该毒株的基因型分类地位进行了初步分析.所测的核苷酸序列大小为
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