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目的:构建结构杆菌H37RV株HSP65基因与IL-12基因的共表达载体PVIV02-HSP65-IL-12,并研究其在VER0-E6细胞内表达的可行性,为新一代结核多价dNA疫苗寻找理论依据。
方法:采用PCR技术,从培养的结核杆菌H37RV中抽提HSP65基因,克隆到PVIV02-mCS上的一个多克隆位上,构建成共表达载体PVIV02-HSP65-IL-12,并经XBAl/AVRII和NC0l/NHEl进行双酶切和测序鉴定。用间接免疫荧光法(IFA)检测HSP65和mIL-12基因在VER0-E6细胞中的表达。
结果:双酶切和测分析证明HSP65基因和mIL-12基因成功克隆到PVIV02-mCS上,且方向正确,序列无突变;间接免疫荧光试验结果为阳性。
结论:共表达载体PVIV02-HSP65-IL-12构建成功,且PVIV02-HSP65-IL-12可在 VwER0-E6细胞中获得共表达。