【摘 要】
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为研究线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu (TUFM)在中强毒力新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达水平的变化,本研究运用比较蛋白质组研究方法分析感染了NDV的CEF的差异表达的蛋白点.将基因Ⅲ型鸡源NDV JS-7-05-Ch、基因Ⅶd亚型鹅源NDV JS-5-05-Go和基因Ⅵb亚型鸽源NDV WX-10-07-Pi三株NDV分别按照10感染复数(MOI)的量接种于密度为85％～
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院,江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,泰州225300 扬州大学农业部畜禽
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
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为研究线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu (TUFM)在中强毒力新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达水平的变化,本研究运用比较蛋白质组研究方法分析感染了NDV的CEF的差异表达的蛋白点.将基因Ⅲ型鸡源NDV JS-7-05-Ch、基因Ⅶd亚型鹅源NDV JS-5-05-Go和基因Ⅵb亚型鸽源NDV WX-10-07-Pi三株NDV分别按照10感染复数(MOI)的量接种于密度为85％～90％ CEF中,同时设立接种PBS的阴性对照组.接种病毒后24h和48h时收获细胞团块,采用细胞裂解液结合超声波裂解方法对CEF进行总蛋白提取,运用96孔Bradford微量酶标板法测定总蛋白浓度基本保持在4.0～5.5 mg/mL范围内.采用17cm pH4-7线性IPG胶条,分别取1.0 mg的不同样品的细胞总蛋白加入水化液中至终体积350μl,进行胶条主动水化和等电聚焦,平衡液Ⅰ和Ⅱ分别平衡14min后,胶条转移至12％浓度的SDS-PAGE凝胶上进行第二向电泳后采用胶体考染方法染色,透射扫描脱色后的凝胶,获得的凝胶图谱运用PDQuest8.0.1软件进行图像分析.CEF总蛋白双向电泳图谱中检测到约850个蛋白点,批内蛋白点在重复样品的匹配率能达到90％以上.量的差异显著性分析采用Students-Test检验法进行统计学分析,在排除一些细胞周期蛋白的基础上,只有三个样本中均重复出现的差异点才可被鉴定是差异表达蛋白质.将表达水平差异显著的蛋白质点胶内酶解后采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS)分析蛋白点.质谱鉴定数据来源于Matrix science公司的Mascot软件搜索的NCBInr数据库.双向凝胶图中标注的差异表达的一种蛋白点经质谱鉴定为TUFM.与24h的阴性对照组相比,在三株NDV感染CEF后24h时,TUFM表达水平均上调,TUFM表达量在毒力最弱的WX-10-07-Pi感染组中显著升高；与48h的阴性对照组相比,感染后48h时TUFM表达量在毒力最强的JS-5-05-Go感染组表达量不降反升且极显著增加,其余两株病毒感染组中TUFM表达量无明显差异且与阴性对照组具有一致的变化趋势.毒力最强的JS-5-05-Go引起宿主表达TUFM量随感染时间增加逐渐增强.该结果表明TUFM的表达水平与NDV毒力强弱具有一定相关性.
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