【摘 要】
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根据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白(NSP2)基因序列设计特异性引物和TaqManMGB荧光探针,经优化反应条件,建立了鉴别HP/LP-PRRSV
【基金项目】
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河南省科技创新人才计划项目(豫科人组[2011]1号)资助
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根据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白(NSP2)基因序列设计特异性引物和TaqManMGB荧光探针,经优化反应条件,建立了鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR((fluorescent quantitative real-timePCR,FQ-PCR)检测方法;进行了二重FQ-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性实验,并对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比实验。结果显示:成功建立了鉴别HP/LP-PRRSV的二重FQ-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101copies/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈现阳性反应曲线,而对5个对照病原扩增曲线均呈现阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较二重RT-PCR方法阳性检出率高。
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