水稻Rho GDP解离抑制因子OsRhoGDI2基因功能的初步鉴定

来源 :中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang3862066
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  水稻OsRhoGDI2基因是通过酵母双杂交筛选获得的水稻Rho家族OsRacD的潜在互作蛋白编码基因,为研究二者在功能上的联系,构建了受控于CaMV35S启动子的与绿色荧光蛋白融合表达的OsRhoGDI2基因和OsRacD基因的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察了融合蛋白在活细胞内分布特点,证实OsRhoGDL2和OsRacD主要分布在细胞质和细胞膜,具有胞内共定位的特征。酵母双杂交体系分析显示,OsRhoGDI2与野生型、激活型的OsRacD可以结合,而与失活型的OsRacD不结合。借助农杆菌介导法将双元植物表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP转化水稻愈伤,经过浸染、筛选和分化,获得了12株分化苗,经基因组DNA的PCR检测,获得7株阳性转基因水稻。半定量RT-PCR检测结果显示,转基因水稻中OsRhoGDI2基因转录水平显著高于对照,说明OsRhoGDI2基因在CaMV35S启动子下,能够在水稻中过表达。表型统计分析显示,与对照水稻相比,转基因水稻的分蘖数和总稻粒数变化不大,而结实率明显降低,提示OsRhoGDI2基因的过表达和水稻育性存在负相关。
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