论文部分内容阅读
Caveolin-1作为膜结构蛋白参与新生细胞膜的形成。缺乏Caveolin-1蛋白的肝脏细胞不能进行脂滴的积累,肝再生受阻;Caveolin-1表达降低后会影响细胞的增殖作用。本实验以张氏肝为研究对象,利用siRNA技术抑制细胞中Caveolin-1蛋白的表达,观察不同浓度酒精作用Caveolin-1基因沉默细胞,其对酒精作用敏感性的变化,Western blot方法检测细胞增殖通路相关蛋白的表达,旨在探讨Caveolin-1蛋白在酒精性肝细胞损伤修复中的作用机制。以特异性siRNA转染人正常肝细胞系(张氏肝细胞),建立Caveolin-1低表达的人肝细胞模型(CAV7)。建立酒精肝细胞损伤模型,检测不同浓度酒精作用对正常肝细胞的影响。建立小鼠急性酒精肝损伤模型,分离肝组织细胞膜与胞浆中蛋白,观察Caveolin-1蛋白在细胞膜及胞浆中表达的变化。进行磷脂预保护实验,分别作用于酒精肝细胞损伤模型及小鼠急性酒精肝损伤模型,观察磷脂作用对Caveolin-1蛋白表达的影响。不同浓度酒精作用CAV7细胞,以张氏肝细胞为对照,检测当Caveolin-1基因沉默时肝细胞对酒精作用敏感性的变化及细胞增殖通路相关蛋白表达的变化。结果发现,以不同浓度酒精作用于张氏肝细胞,细胞中Caveolin-1表达随酒精浓度的增高而降低;分离小鼠肝脏细胞膜及胞浆蛋白,发现酒精损伤使细胞膜及胞浆中Caveolin-1蛋白表达均降低。磷脂预保护作用可使张氏肝细胞中Caveolin-1表达升高;并且可使细胞膜及胞浆中Caveolin-1表达均升高。利用siRNA转染张氏肝细胞使Caveolin-1基因沉默,细胞对酒精作用敏感性增加;并且使细胞内PKCα及磷酸化MAPK等增殖通路相关蛋白表达下调。结果提示,Caveolin-1蛋白参与了肝细胞的损伤修复,在Caveolin-1基因沉默的张氏肝细胞中Caveolin-1表达的不足阻抑了新细胞膜的形成,并且抑制了细胞的增殖作用,从而降低了细胞的损伤修复能力。由此证明了Caveolin-1蛋白在肝细胞的酒精损伤修复中发挥着重要作用。