氨苯砷酸完全抗原的合成及鉴定

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背景:氨苯砷酸(Arsanilic acid,ASA)是一种抗菌剂,饲料添加剂,可用于促进猪、鸡等家畜的生长。ASA还可使机体同化作用加强,促进蛋白质合成,改善机体营养,增强骨髓的造血机能。但是,许多研究都指出使用氨苯砷酸添加剂高于推荐值水平时可导致氨苯砷酸在动物体内累积。另一方面,饲料中的氨苯砷酸在动物体内不能被吸收和分解而随粪便排出,这些被污染的有机肥被用在农田中会造成环境污染。因此我们需要一种有效的方法检测出饲料中过量的ASA。现如今,最常用的检测方法为仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法包括质谱法(MS)和高效液相色谱法(HPLC)。该方法往往需要昂贵的仪器、操作繁琐且需要专业的技术人员,不适用于检测大量样品。目的 :本实验的目的是从免疫分析法的角度着手,合成氨苯砷酸完全抗原,为后续制备氨苯砷酸单克隆抗体打下基础,从而建立快速、灵敏的ASA残留的检测方法。方法 :本研究利用重氮化法把ASA和牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)偶联合成免疫原ASABSA,把ASA和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联合成检测原ASA-OVA。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和紫外扫描的方法鉴定合成的抗原,结果显示紫外扫描波峰有明显偏移初步鉴定合成成功。并用考马斯亮蓝蛋白含量测试盒测得制备的完全抗原ASA-BSA的蛋白浓度为2 mg/m L,ASA-OVA的蛋白浓度为1.6 mg/m L。最后用ASA-BSA免疫6-8周龄的Balb/c雌性小鼠,采用皮下多点注射的方法,四免后尾部采血测得小鼠血清抗体效价,最高可达1:6400,半数抑制浓度(IC50)为1.22 ng/uL。结果 :实验结果表明ASA-BSA免疫的小鼠产生了免疫应答,成功制备了ASA-BSA完全抗原,为下一步获得特异性的单克隆抗体奠定了基础。
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