目的 探索核糖体蛋白S6(Ribosomal protein S6,rpS6)在高等真核细胞核仁中的定位及功能。方法 在高等真核细胞HEK293中,利用免疫荧光双标技术、邻位连接技术、免疫共沉淀技术、活细胞工作站、细胞周期阻滞、EGFP融合蛋白构建、激光共聚焦观察、Northern blot检测等实验探讨了rpS6在高等真核细胞核仁中的定位及功能。结果 通过免疫荧光双标实验和邻位连接技术首次发现rpS6在高等真核细胞核仁中是U3核蛋白复合体的组成成分。活细胞工作站和细胞周期阻滞实验表明：rpS6蛋白动态的存在于U3核蛋白复合体中,进出U3核蛋白复合体与细胞周期有关,S期的中后期进入,M期核仁消失时离开。通过构建rpS6蛋白与EGFP的融合蛋白,转染高等真核细胞HEK293和Hela细胞发现,rpS6蛋白的入核信号可能是215KR[MKEA KEKRQEQIA]K RRR233,主要的核仁结合序列是173APKIQRLV TPRVLQHKRR RIALKKQRTK203,此外,还发现188KRRR191是rpS6蛋白在细胞质定位的关键序列。在高等真核细胞中,rpS6蛋白C端的5个丝氨酸磷酸化位点(Ser235、Ser236、Ser240、Ser244和Ser247)是其主要功能域,Northem blot实验结果表明rpS6蛋白可以通过其C端的这5个丝氨酸磷酸化位点参与30S前体rRNA加工成为成熟的18S rRNA的过程。结论 rpS6蛋白是高等真核细胞中U3核蛋白复合体的动态组成成分,其功能与前体rRNA的加工成熟有关,为深入的研究rpS6蛋白在细胞生命活动中的功能奠定了基础。