腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)作为细胞内的能量感受器,在细胞增殖、分化、代谢中具有重要作用。通常认为AMPK信号通路激活促进自噬,但有研究报道抑制AMPK自噬增加,其分子机制有待于进一步研究。Rafonin(A304)分离自矛束霉(Doratomyces sp.),对癌基因ras诱导的肿瘤细胞株有显著的抑制活性,有潜在抗癌作用。我们研究发现A304处理细胞会降低AMPK的磷酸化和其激酶活性,同时促进细胞自噬。利用AMPK抑制剂Compound C(CC)刺激不同肿瘤细胞,我们发现类似结果,并且在肾癌细胞中,CC能够促进A304引起的自噬。酶标仪检测结果表明A304和CC均可以提高细胞乳酸的产量,说明这两种化合物能够激活糖酵解途径。大量证据表明即使在有氧条件下,肿瘤细胞也是利用糖酵解途径提供能量的。基于此,抑制糖酵解也是临床药物开发的靶点。该途径的三个重要限速酶分别是己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)。其中磷酸果糖激酶家族2中的PFKFB3,因其激酶活性是其磷酸酶活性的700多倍而备受关注。利用HK2和PFKFB3抑制剂我们发现这二者均会减少A304和CC引起的细胞自噬。进一步研究表明,AMPKα缺失会促进A304引起的早期自噬和caspase依赖的凋亡。因此我们认为AMPK调控细胞自噬可能与糖酵解有关,且其对自噬的影响具有双重作用。