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血栓是当代社会严重危害人类生命健康的疾病之一,现有的抗血栓药物大多存在较大的副作用。因而,开发出具有抗血栓功能的活性肽具有重要的意义。酪蛋白是牛乳中含量最高的一类蛋白质,约占牛乳总蛋白的80%。本研究旨在以酪蛋白为原料,采用胰蛋白酶进行水解,恒定水解温度37℃,pH 8.0,底物浓度4%,通过改变酶解体系中加酶量(1000~5000u/g)及水解时间(0.5~4h),以水解产物中抗凝血活性为评价指标,确定出最佳加酶量及水解时间。同时,对最优条件进行水解度测定,再利用Q+TOF对水解产物进行分析鉴定。结果表明,当加酶量为4000u/g,水解时间为3h时,水解产物的活性最高,对凝血酶的抑制率为76.25%,此时水解度为12.34%;同时,Q+TOF鉴定出丰度较大的十种肽,其中序列为HQGLPQEVLNENLLR、FFVAPFPEVFGK、EDVPSER、YLGYLEQLLR的四种肽来自于Alpha+S1-casein,序列为NMAINPSK、NAVPITPTLNR、FALPQYLK的三种肽来自于Alpha+S2-casein,序列为VLPVPQK、AVPYPQR、GPFPIIV的三种肽来自于Beta+casein。本研究结果,为酪蛋白生物活性肽尤其是抗血栓活性肽的深度开发、酪蛋白活性肽在功能性食品领域的应用等奠定了一定的理论基础。