【摘 要】
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建立ISSR-PCR反应体系,探索库页悬钩子的遗传多样性,为库页悬钩子种质资源研究奠定基础.采用改良CTAB法和离心柱法分别提取库页悬钩子叶片和茎段全基因组DNA,用琼脂糖凝
【机 构】
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内蒙古医科大学药学院,内蒙古呼和浩特010110
【出 处】
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第二届中国民族医药学会药用资源分会年会暨2017年民族药资源学术交流会
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建立ISSR-PCR反应体系,探索库页悬钩子的遗传多样性,为库页悬钩子种质资源研究奠定基础.采用改良CTAB法和离心柱法分别提取库页悬钩子叶片和茎段全基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法进行检测,确定最佳的提取部位和提取方法.进一步采用单因素分析与正交试验相结合的方法,对影响ISSR-PCR反应的5个主要因素(引物,模版DNA,Mix酶,去离子甲酰胺、牛血清白蛋白))进行考察,选出最佳的ISSR-PCR反应体系.实验结果表明：离心柱法提取叶片全基因组DNA效果最好,A260/A280值为1.83.ISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)是引物2(AGAGAGAGAGAGAGAGAT)0.3μmol·L-1,模板DNA 30ng,Mix酶11μL,去离子甲酰胺0.75％,牛血清白蛋白3μg·mL-1.
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