【摘 要】
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目的 卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)作为人体血浆中胆固醇酯化的唯一催化酶,其活性测定在高密度脂蛋白(HDL)的代谢研究和动脉粥样硬化性心血管病(CVD)的预测评估中具有重要作用.然而,目前现有的LCAT测定多采用放射性同位素或荧光标记胆固醇作为底物,方法设计多样、底物制备过程繁琐、稳定性差；且测定结果可能受各种外源物质的影响.本研究拟选用具有紫外吸收的甾醇作为胆固醇类似物,简化底物组成,优化反
【机 构】
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北京大学第五临床医学院(北京医院),北京100730 北京医院国家老年医学中心,北京100730
【出 处】
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第六届中国老年健康论坛暨首届健康产业峰会
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目的 卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)作为人体血浆中胆固醇酯化的唯一催化酶,其活性测定在高密度脂蛋白(HDL)的代谢研究和动脉粥样硬化性心血管病(CVD)的预测评估中具有重要作用.然而,目前现有的LCAT测定多采用放射性同位素或荧光标记胆固醇作为底物,方法设计多样、底物制备过程繁琐、稳定性差；且测定结果可能受各种外源物质的影响.本研究拟选用具有紫外吸收的甾醇作为胆固醇类似物,简化底物组成,优化反应条件,建立简便、精密的高效液相色谱(HPLC)测定LCAT活性的方法,进一步研究LCAT活性与CVD危险因素的关系.方法 方法学建立.选用7-脱氢胆固醇(7-DHC)和1,2-二癸酰基甘油-3-磷酸(10：0PC)作为LCAT的反应底物,加入LCAT激活肽(LAP642),经涡旋震荡制备脂质体；在冰水浴中将500μL脂质体与10μL血清混合,37℃温育1小时；正己烷提取脂质,HPLC同时分离测定7-DHC及其酯化产物,计算酯化率和LCAT活性.用所建方法测定120例健康志愿者血清LCAT活性,分析LCAT活性与CVD危险因素的关系.结果 7-DHC、10：0PC(摩尔比为1：8.5)与LAP642组成的脂质体制备简单、性质稳定.由于7-DHC具有共轭双键,于280nm处具有紫外吸收,故7-DHC及其酯可同时进行HPLC分离测定,无需内标和校准品,通过峰面积比计算LCAT活性.温育时间0-8h、血清量0-20μl时,LCAT活性与变量呈线性相关,符合零级反应,结果反映LCAT活性；平均批内不精密度(CV)和总CV均小于2.5％,结果重现性好.120例样本LCAT活性与BMI、TG等正相关(P<0.05)；与apoAI(P<0.05)、HDL(P<0.001)等负相关；LCAT活性与内源底物法测得的FERHDL(P<0.0001)及LCAT质量(P<0.0001)显著正相关.结论 本研究建立了HPLC测定LCAT活性的外源底物法,所建方法简便、精密、准确,结果不受反应底物的影响,为进一步研究LCAT与HDL代谢及CVD危险分析提供了可靠的方法学基础.
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