【摘 要】
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目的：采用p53基因功能完整的人成淋巴TK6细胞,建立流式细胞术检测体外微核的方法,并与本实验室前期建立的CHO-K1细胞流式细胞术体外微核试验方法和结果进行比较.方法：本实
【机 构】
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国家上海新药安全评价研究中心 上海201203
【出 处】
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2016年第六届全国药物毒理学年会
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目的：采用p53基因功能完整的人成淋巴TK6细胞,建立流式细胞术检测体外微核的方法,并与本实验室前期建立的CHO-K1细胞流式细胞术体外微核试验方法和结果进行比较.方法：本实验采用悬浮培养的TK6细胞,培养于U形96孔板,选取两个经典遗传毒性化合物丝裂霉素C(Mitomycin C,MMC)和环磷酰胺(Cyclophosphamide,CP),分别设定4个浓度,MMC的终浓度为0.032μg/ml、0.063μg/ml、0.083μg/ml、0.125μg/ml,CP的终浓度为5μg/ml、7.5μg/ml、10μg/ml和15μg/ml；分别进行4h+S9短时处理和24h-S9持续处理,经叠氮溴乙锭(Ethidium Monoazide,EMA)染色并进行30分钟光活化,获取及排除凋亡或坏死细胞,加入含有裂解液和RNA酶的SYTOX Green染色孵育1小时,标记所有DNA,获得染色不同的正常细胞和死亡细胞,通过流式细胞仪检测获得微核和细胞周期信息；并加入6μm计数珠,通过核珠比率获得细胞毒性信息.
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