【摘 要】
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蒲氏钩蝠蛾Thitarodespui 幼虫是冬虫夏草形成的物质营养基础,幼虫体内合成的储存蛋白(Storage Protein)是重要的蛋白质和氨基酸库,对蛹期和成虫期变态发育起着重要的作
【机 构】
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中山大学有害生物控制国家重点实验室,广州,510275
【出 处】
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2014年全国害虫生物防治学术研讨会
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蒲氏钩蝠蛾Thitarodespui 幼虫是冬虫夏草形成的物质营养基础,幼虫体内合成的储存蛋白(Storage Protein)是重要的蛋白质和氨基酸库,对蛹期和成虫期变态发育起着重要的作用.从蒲氏钩蝠蛾转录组数据库筛选得到一种储存蛋白(TpuSP)基因序列片段,设计特异引物进行RACE 扩增,得到核酸序列长度为2302bp 全长片段,开放阅读框2115bp,编码704 个氨基酸,预测分子量为81.96 kDa,理论等电点pI 值为6.04,在1-17 位氨基酸检测到信号肽片段.TpuSP 氨基酸组成显示酪氨酸与苯丙氨酸占整个氨基酸组成12.36％,甲硫氨酸比例为4.69％.蛋白特征基序YYTEDIGLQLFYYNYHLDYP 和TAMRDPMFY 相对保守.与NCBI 数据库比对结果表明该基因编码的氨基酸序列在33-157 位氨基酸存在hemocyanin_N 结构域,在161-436 位氨基酸存在含铜离子结合位点的hemocyanin_M结构域,在442-693 位氨基酸存在Hemocyanin_C 结构域.Blastx 结果表明与达氏按蚊Anophelesdarlingi 储存蛋白2、埃及伊蚊Aedesaegypti 储存蛋白、致倦库蚊Culexquinquefasciatus 幼虫血淋巴蛋白序列相似性最高,分别为45％、44％、44％.构建系统发育树结果显示TpuSP与双翅目达氏按蚊Anopheles darlingi 储存蛋白2 、埃及伊蚊Aedesaegypti 储存蛋白2、致倦库蚊Culexquinquefasciatus 幼虫血淋巴蛋白2 亲缘关系最近.而鳞翅目甜菜夜蛾Spodopteraexigua 富甲硫氨酸储存蛋白、斜纹夜蛾Spodopteralitura 富甲硫氨酸储存蛋白、惜古比天蚕Hyalophoracecropia 适量甲硫氨酸储存蛋白前体单独聚为一支,亲缘关系较远,据此推测虽然TpuSP 氨基酸组成符合富甲硫氨酸类储存蛋白,但可能不属于富甲硫氨酸类储存蛋白.利用qPCR 测定不同发育阶段储存蛋白基因表达量,结果表明：幼虫阶段,随着龄期增长,TpuSP 表达量持续上升,在末龄达到最高；蛹期和成虫期,TpuSP 表达量急剧下降,几乎不表达.
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