【摘 要】
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目的：研究建立克隆入神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因。制备鼠抗人NSE单克隆抗体方法。 方法：用NSE特异引物，通过逆转录多聚酶链式反应从人肺癌细胞株A549中扩增人NSE基因，构建
【出 处】
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第三届华北三省两市检验医学学术会议
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目的：研究建立克隆入神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因。制备鼠抗人NSE单克隆抗体方法。
方法：用NSE特异引物，通过逆转录多聚酶链式反应从人肺癌细胞株A549中扩增人NSE基因，构建重组质粒pGEM-T-NSE，并测序鉴定人NSE基因序列。再将NSE基因定向克隆于原核高效表达载体pMS-31b，表达MS2-NSE融合蛋白后，免疫BALB/C小鼠。应用常规杂交瘤技术，制备鼠抗人NSE单克隆抗体(NSE McAb)。最后采用免疫细胞化学(ICC)技术检测NSE在肿瘤细胞株中的表达。
结果：克隆出全长1305bp的NSE基因，其表达的MS2-NSE融合蛋白为57 000，表达量1.42mg/L。获得两株能稳定分泌抗NSE单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经检测其分泌抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a。ICC检测证明所得单克隆抗体NSE McAb能检测到肿瘤细胞中NSE的表达。
结论：成功克隆了NSE基因并获得了鼠抗人NSE McAb，为深入研究NSE基因的表达提供了有力的工具。
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