[研究背景]肉毒毒素是肉毒梭菌产生的蛋白质,分为8个血清型A-H,其中自然存在的A、B、E和F型能够引起人类中毒.肉毒毒素有强神经毒性,属于危害性最高的A类生物战剂之一.各型肉毒毒素均由一个轻链和一个重链构成,其中重链的C端为受体结合区(Hc结构域),可用于制备亚单位疫苗.[目的]本实验室已获得了高水平表达的可溶性A、B、E和F型肉毒毒素重组Hc蛋白抗原,具有良好的体内外活性,并已完成了各型重组抗原的中试工艺研究,可作为人用肉毒毒素亚单位疫苗抗原.本研究旨在制备高效、安全的A、B、E、F型肉毒毒素四价疫苗,并对其有效性和稳定性进行临床前评价.[方法]首先确定四价疫苗的制剂配方：佐剂选择铝佐剂,通过体外结合实验,定量检测不同缓冲盐体系和pH条件下各型抗原与铝佐剂的结合率和最大结合量,从而确定缓冲盐体系,配制四价疫苗.然后通过免疫Balb/c小鼠检测四价疫苗制剂的有效性,同时将配制好的制剂四度存放,观察其稳定性.[结果]四价疫苗制剂配方：20mM pH6.0磷酸盐缓冲盐体系、10％ (W/V)甘露醇、2mg/mlA12O3佐剂,各型抗原终浓度40-80ug/ml.四价疫苗有效性：四价疫苗二次免疫Balb/c小鼠后产生了针对各型抗原的高水平ELISA抗体反应,能够完全保护105LD50剂量的A、B、F型肉毒毒素攻毒,中和抗体水平达到l-2.5IU/ml.四价疫苗稳定性：定量检测结果表明,4度放置1个月、3、6个月后的制剂中各型抗原能够维持和铝佐剂很好的结合,四价疫苗稳定性很好.[结论]本研究所制备的四价疫苗制剂免疫动物后能够产生针对各型肉毒毒素的免疫反应和保护作用,具有较好的有效性和稳定性,可作为候选疫苗进行临床前研究,用于预防A、B、E、F型肉毒毒素中毒.