【摘 要】
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以质粒pYTFD5和pYFAD4为模板,扩增获得860bp的△5-延长酶基因(e105和1600bp的△4-脱饱和酶基因(fad4).利用重叠延伸PCR构建融合基因e105-fad4,与pMD-18Tsimple vector连接、
【机 构】
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福建师范大学夏盛酶工程联合实验室,福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心 福州 350108
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以质粒pYTFD5和pYFAD4为模板,扩增获得860bp的△5-延长酶基因(e105和1600bp的△4-脱饱和酶基因(fad4).利用重叠延伸PCR构建融合基因e105-fad4,与pMD-18Tsimple vector连接、测序验证.Hind Ⅲ/SphI双酶切后连接到经同样处理过的pYES2.O载体,构建重组表达质粒pYEL05-FAD4.转化酿酒酵母缺陷型菌株INVScl,通过SC—U选择性培养基筛选阳性克隆子.添加外源脂肪酸C20:5底物,半乳糖诱导表达.气相色谱分析表明阳性克隆子总脂肪酸中出现了二十二碳六烯酸C22:6,融合基因e105-fad4在酿酒酵母中得到了表达.
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