【摘 要】
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水解高空间位阻类底物效率低下,对映体选择性差;S型选择性腈水解酶缺乏;水解反应过程生成酰胺副产物等成为影响腈水解酶应用的三个限制因素.本文从这三个问题入手,通过新酶的
【机 构】
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华东理工大学生物工程学院,上海,200237中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛,266071
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水解高空间位阻类底物效率低下,对映体选择性差;S型选择性腈水解酶缺乏;水解反应过程生成酰胺副产物等成为影响腈水解酶应用的三个限制因素.本文从这三个问题入手,通过新酶的挖掘及蛋白质工程改造来获得理想的生物催化剂.本文引入了基于系统进化分析的底物特异性预测方法，从基因组数据库中特异性地挖掘到来源于BurkholderiacenocepaciaJ2315的新型芳基乙睛类睛水解酶BCJ2315。BCJ2315对扁桃睛及其衍生物表现出了显著的酶活及对映体选择性。以高空间位阻底物邻氯扁桃睛作为靶标，从溶剂工程、蛋白质工程及反应工程三个方面最终实现了光学纯的(R)-(-)-邻氯扁桃酸高浓度的酶法合成。结合同源建模及分子对接技术，从结构上初步解析了突变体性能提高的分子基础。
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