内毒素(ET)是1种广泛存在于自然界中,由革兰氏阴性细菌表面释放,常造成食物、药物、试剂和溶液污染,从而严重威胁人、畜安全健康的致病因子。一定剂量的内毒素进入机体后可引发内毒素血症,严重者将导致内毒素休克,本实验就从红细胞膜角度探讨内毒素损伤机制及阳离子A(CA)的保护作用。将24只实验用日本大耳白兔平均分为正常对照组(Ⅰ组)、内毒素组(Ⅱ组)和阳离子A拮抗组(Ⅲ组),每组8只,通过静脉分别注射无热源生理盐水(NS)、ET和CA+ET。3组兔处理后在第0.5h、1h、3h、5h、7h从耳缘静脉采血5 ml,用于制备红细胞膜磷脂。用高效液相色谱法分别测定3个组别红细胞膜中的磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)含量变化。结果显示,Ⅱ组中除PE在0.5h没有明显变化外(P>0.05),PC、PE、PS、PI含量在第0.5h、1h、3h、5h、7h均低于Ⅰ组(P<0.05,P<0.01);而Ⅲ组中除PS、PE和PI在0.5 h、PC在1 h、PI在3 h没有明显变化外(P>0.05),整个时间段中上述4种磷脂的含量均高于Ⅱ组(P<0.05,P<0.01)。已有研究表明,ET对磷脂的水解是通过磷脂酶A2(PLA2)来完成的。体外实验亦证明PLA2与膜磷脂孵育,可产生大量不饱和脂肪酸及溶血磷脂酰胆碱,同时PC和PE含量明显降低。因此可以推断,本实验中正是在ET的作用下,膜PLA2的活性升高,导致4种膜磷脂含量明显下降,从而改变了膜脂区的微环境成分,实现了膜损伤的生物学效应。磷脂是构成红细胞膜流体镶嵌脂质双层的主要成分及细胞酶体系的调节剂,磷脂降解势必与红细胞膜的物质转运、胞膜流动性及红细胞形态密切相关,并影响血液的黏滞性和血液凝固。此外,lipid A是ET的毒性和生物活性中心,也是最保守的部分。现已发现lipid A分子上的磷酸基团能携带大量的负电荷,可使ET与阳离子发生强烈的相互作用,故阳离子对ET的物理特性和生物学功能发挥有显著的影响。我们采用CA作为多价阳离子拮抗剂进行ET保护效应的研究,并且已有实验证实在体外CA可直接破坏ET正常规则的网状结构,使其失去生物学活性,从而为CA拮抗ET提供了有力证据。本实验结果显示,从膜的磷脂代谢水平上看,CA在体内同样具有一定的ET拮抗效应,故推测CA对红细胞膜具有一定的保护作用,而可能的作用机制就是进入体内的CA首先中和体循环中部分ET,使ET在血循环中的浓度有所降低,从而减少ET对膜的损伤。但CA是否还可以通过阻断ET诱发产生其它的内源性炎性介质、或者其本身就直接对生物膜具有保护作用,还有待于进一步研究。